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                                      看完這篇文章你就了解核糖核酸酶的三個主要類別了

                                      發布時間:2021-07-24      點擊次數:332

                                          核糖核酸酶,白色粉末。為具有球蛋白性狀的一種蛋白質。溶于水、50%丙酮。此酶最適宜溫度為60℃,85℃以上失去作用,最適宜的pH值為7.6。是催化核糖核酸水解的一種核酸內切酶,可使胞嘧啶核酸解聚。對胸腺核酸則無作用。用于生化研究。

                                          核糖核酸酶的分類:

                                          (一)核糖核酸酶A

                                          核糖核酸酶A(RNAseA)來源于牛胰臟,是一種內切核糖核酸酶,可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵,反應終產物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價陽離子存在時,核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑(RNasin)或氧釩一核糖核苷復合物(vanadyl—ribonuclosidecomplex,VRC)所抑制。RNAseA的反應條件極廣,且極難失活。在低鹽濃度(0~100mmol/lNaCl)下,RNAseA切割單鏈和雙鏈RNA、DNA:RNA雜交體中的RNA;當NaCl濃度為300mmol/l?;蚋邥r,RNAseA就特異性切割單鏈RNA。去除反應液中的RNAseA,通常需要蛋白酶K處理、酚反復抽提和乙醇沉淀。在分子克隆中,核糖核酸酶A的主要用途為:

                                          ①從DNA:RNA雜交體中去除未雜交的RNA區。

                                          ②確定RNA或DNA中的單堿基突變的位置。在RNA:DNA或RNA:RNA雜交體中,若存在單堿基錯配,可用RNAseA識別并切割。通過凝膠電泳分析切割產物的大小,即可確定錯配的位囂。

                                          ③RNA檢測。RNA酶保護分析法(RNAseprotectionassay)是近年來發展起來的一種檢測RNA的雜交技術。其基本原理是利用單鏈RNA探針,與待測的RNA樣品進行雜交形成RNA:RNA雙鏈分子,由于RNA酶可專一性地降解未雜交的單鏈RNA,而雙鏈受到保護不被降解,經凝膠電泳可以確定目的RNA的長度。該方法靈敏度較Northern雜交法更高,并可進行較為準確的定量。選擇適當的探針,還可進行基因轉錄起始位點分析及內含子(也稱內元)剪切位點分析等研究。此法的靈敏度比核酸酶S1保護分析法高數倍。

                                          ④降解DNA制備物中的RNA分子。須使用無DNAsd的RNAse(DNaseIfreeRNAse),市售的一般RNAseA常含有DNAse,可在100retool/ITris—CI(pH7.5)和15mmol/l。NaCI溶液中100℃加熱15min,以去除之。

                                          (二)核糖核酸酶T1

                                          核糖核酸酶T1(RNAseT1)來源于米曲霉(Aspergillusorjzae),它特異地作用于鳥嘌呤3’端磷酸,切割位點在鳥嘌呤的3’磷酸和相鄰核苷酸的5‘羥基之問的磷酸二酯鍵,反應終產物為3’鳥苷酸和末端帶3’鳥苷酸的寡核苷酸片段。RNAseTl的反應條件極廣,且極難失活,其催化活性類似于RNAseA。

                                          在RNA酶保護實驗中,RNAseT1與RNAseA聯合使用,對RNA進行定量和作圖;還可用于去除DNA:RNA雜交體中未雜交的RNA區。

                                          (三)核糖核酸酶H

                                          核糖核酸酶H(RNAseH)最早是從小牛胸腺組織中發現的,其編碼基因已被克隆到大腸桿菌中。它能特異地降解DNA:RNA雜交雙鏈中的RNA鏈,產生具有3’一OH和5’一磷酸末端的寡核苷酸和單核苷酸,它不能降解單鏈或雙鏈的DNA或RNA。

                                          在分子克隆中,核糖核酸酶H的主要用途是與大腸桿菌DNA聚合酶工和DNA連接酶一起參加cDNA克隆中第二條I)NA互補鏈的合成。當用逆轉錄酶以mRNA為模板合成cDNA第一鏈之后,用RNAseH部分消化mRNA:DNA雜交分子中的RNA,產生的RNA片段就像岡崎片段一樣,作為大腸桿菌DNA聚合酶T的引物,以cDNA第一鏈為模板合成DNA,直到把mRNA全部代替。然后在DNA連接酶的作用下,封閉缺口形成雙鏈cDNA。
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